孵育一抗之前要关闭孵育时刻往后，加一抗之前不要洗掉，只移除剩余液体即可.之后不需求再关闭，可是一抗和二抗都应该用富含BSA的缓冲液来稀释。有些人还加tween来削减非特异性联系。关闭抗原也能够运用二抗抗体所属动物品种的血清.没有一致固定的浓度要看状况。免疫荧光技能（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技能，是符号免疫技能中开展最早的一种。首要是使用荧光符号的抗体与待测抗原间反响进行抗原或许半抗原物质定位的技能。关闭剂在细胞免疫荧光中的使用 免疫荧光双标试验操作方法与注意事项 在同一组织细胞标本上需求一起检测两种抗原时，需进行两层荧光染色。两层免疫荧光符号法（double immunofluorescence labeling method）也分为直接法和间接法。细胞免疫荧光染色操作过程 、若干免疫荧光技能常见问题及剖析小鼠胚胎发育过程中表皮生长因子受体的免疫荧光定位研讨，免疫符号法可分为以下几类：荧光免疫法、放射免疫法、酶联免疫法（ELISA）、偶联生物素—亲和素体系的酶免法、时刻分辩荧光免疫剖析、解离增强镧系元素荧光免疫剖析。免疫荧光试验的首要过程包含细胞涂片的制备、细胞的固定及通透（或称为透化）、细胞关闭、一抗和二抗抗体孵育及荧光检测等。